第一次使用紫外交联仪时，真正容易出问题的往往不是“不会开机”，而是不知道应该先选波长还是先设剂量、能量模式和时间模式有什么区别、样品应该怎么摆放，以及实验结束后应该记录哪些参数。

一套规范的操作流程，核心并不是把步骤记得越多越好，而是保证每次实验都按照相同的逻辑执行：确认实验要求 → 确认波长 → 选择工作模式 → 设置参数 → 放置样品 → 启动照射 → 记录结果。

下面以实验室常见紫外交联流程为例，说明紫外交联仪的标准使用方法。具体实验剂量、时间和波长仍应以实验protocol、文献以及已经验证的实验条件为准。

图1：VL-1000C紫外交联仪，正式操作前应先明确实验波长和运行模式

一、第一步：先确认实验需要什么紫外波长

操作紫外交联仪之前，首先确认的不是时间，而是实验要求的紫外波长。

实验室常见的紫外波长包括254nm UVC、302nm UVB和365nm UVA，不同波长对应的实验目的不同。例如，Southern blot、Northern blot等核酸膜固定以及经典CLIP通常涉及254nm；UVB诱导DNA损伤研究可能使用302nm；PAR-CLIP、psoralen及部分光敏反应则可能使用365nm。

因此，如果protocol明确要求254nm，就应使用对应的254nm设备或确认三波长设备已经切换到正确波长。不要因为设备都叫“紫外交联仪”，就默认所有实验使用相同光源。

如果还不清楚实验应该使用哪种波长，可以先查看紫外交联仪有哪些用途？254/302/365nm怎么选。

二、第二步：检查设备和样品状态

确认波长以后，再进行开机前检查。

首先检查设备供电、舱门和控制界面是否正常，曝光室内部不要遗留上一次实验的样品、液体或其他杂物。

随后检查待处理样品。膜、培养皿或其他实验材料应按照实验方法准备完成，并保证样品能够平整、稳定地放入有效照射区域。

如果一次同时处理多个样品，应提前确认曝光室能够容纳当前样品数量，避免正式运行时为了“多放几个”而出现样品重叠、遮挡或者超出有效曝光范围。

三、第三步：选择能量模式还是时间模式

这是紫外交联仪使用过程中非常关键的一步。

能量模式通常按照mJ/cm²设置目标紫外剂量。设备实时累计紫外能量，当达到设定值以后结束照射。

时间模式则按照已经验证的照射时长运行，更适合已有成熟条件并明确按照时间控制的实验流程。

以VL-1000C为例，设备提供自动、能量、时间和预设程序等工作模式。对于需要长期进行批次比较的核酸膜交联实验，采用经过验证的能量条件通常更方便记录和重复；对于已经建立固定时间条件的实验，也可以使用时间模式。

需要强调的是，不要把某一个固定剂量当成所有紫外交联实验的通用参数。不同样品、膜类型、实验方法以及研究目的对应的条件可能不同，应优先采用实验protocol或经过预实验验证的参数。

四、第四步：输入参数或调用已验证程序

确定工作模式以后，再输入目标参数。

如果选择能量模式，按照实验方案输入目标剂量；如果选择时间模式，则输入已经验证的照射时间。

对于经常重复进行的实验，可以把成熟参数保存为程序。例如不同膜类型、不同实验项目或不同处理条件分别建立程序，后续直接调用。

这样做的意义不仅是操作更方便，更重要的是减少不同人员重复输入参数时产生的错误。

VL-1000C支持多组程序存储，因此对于多人共享设备或者长期进行固定实验的课题组，可以按照“实验名称+样品类型”建立自己的参数记录方式。

图2：实验条件确定后，可根据设备配置设置能量、时间或调用已保存程序

五、第五步：正确放置样品

参数设置完成以后，再打开舱门放置样品。

样品应尽量放置在有效曝光区域内，并根据实验要求保证受照面朝向紫外光源。膜类样品应尽量保持平整，避免折叠；多个样品同时处理时，不要相互堆叠或遮挡。

这一点很重要，因为即使设备设置的是同一个目标剂量，不同位置、遮挡状态和样品摆放方式仍然可能影响实际受照条件。

因此，对于需要长期比较实验结果的用户，建议不仅记录设备参数，同时保持每批样品的放置方式尽量一致。

图3：样品放置位置也是紫外实验重复性需要控制的条件之一

六、第六步：关闭舱门并启动照射

确认样品和参数无误以后，关闭舱门并启动对应程序。

设备开始运行后，应观察控制界面的工作状态是否正常。如果采用能量模式，可以关注累计剂量变化；使用时间模式时，则按照设定时间运行。

VL-1000C能量模式可实时累计254nm UVC剂量，并在达到目标值以后自动停止，从而减少人工判断结束时间带来的差异。

设备运行过程中不要人为绕过舱门联锁或安全保护。如需要提前终止实验，应通过设备正常的停止方式结束程序。

七、第七步：实验结束后取出样品

当设备提示程序完成、紫外输出停止以后，再按照正常流程打开舱门并取出样品。

取出的膜、培养皿或其他样品应立即进入后续实验步骤，或者按照对应实验方法规定的条件保存。

不要额外增加“再照一会儿更保险”这类未经验证的操作。紫外交联并不是曝光越多越好，实验条件应该保持在已经验证的范围内。

八、第八步：记录本次实验条件

很多实验室使用紫外交联仪时，只记录“做过一次紫外交联”，但没有记录具体条件。这样一旦后续实验结果发生变化，很难判断问题出在哪里。

建议至少记录以下信息：

当这些信息连续记录几批以后，就更容易判断某一个实验条件是否稳定，也便于不同实验人员按照同一套方法重复操作。

九、紫外交联仪标准使用流程可以概括成什么？

如果把整个过程压缩成一条操作链，可以概括为：

确认实验方法 → 选择正确波长 → 检查设备与样品 → 选择能量或时间模式 → 输入参数 → 放置样品 → 关闭舱门 → 启动程序 → 实验结束 → 记录条件。

对于第一次建立紫外交联条件的实验，不建议直接照搬其他实验室的固定剂量或固定时间。先根据protocol确定波长和初始条件，再结合样品实际结果优化，最终把成熟参数保存下来，通常更有利于后续重复实验。

如果需要进一步了解紫外交联仪使用过程中有哪些安全、维护和灯管状态问题，可以查看紫外交联仪使用注意事项：安全操作与维护保养指南。

如果实验明确需要254nm UVC，可以查看VL-1000C 254nm UVC紫外交联仪；需要比较不同波长设备，可进入紫外交联仪产品中心进一步选择。